ABSTRACT. Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid is the causal agent of charcoal rot and vine decline in cucurbits such as watermelon. Molecular methods have been used for rapid identification. However, a large number of steps used reduces its applicability. This study aimed to detect M. phaseolina in watermelon from producing areas in Northeastern Brazil by direct PCR. Plant tissue samples were collected from seven producing areas and the DNA was extracted using the CTAB method. Amplifications were performed by direct PCR using the MpKFI/MpKRI primers, then the PCR products were subjected to agarose gel electrophoresis and sequenced. Amplicons of 350 bp were observed in stem tissue samples from three areas. The identity of the samples was confirmed by sequencing. This study represents the first molecular diagnosis of M. phaseolina associated with watermelon in Northeastern Brazil. The methodology presented here can be applied for a reliable and simple diagnosis of the pathogen in other crops.

BACKGROUND In Brazil the implementation of the Sentinel Surveillance System of Influenza began in 2000. Central public health laboratories use reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) for diagnosis of respiratory viruses, but this protocol identifies only specific targets, resulted in inconclusive diagnosis for many samples. Thus, high-throughput sequencing (HTS) would be complementary method in the identification of pathogens in inconclusive samples for RT-qPCR or other specific detection protocols. OBJECTIVES This study aimed to detect unidentified viruses using HTS approach in negative samples of nasopharynx/tracheal secretions by the standard RT-qPCR collected in the Federal District, Brazil. METHODS Nucleic acids were extracted from samples collected in winter period of 2016 and subjected to HTS. The results were confirmed by the multiplex PR21 RT-qPCR, which identifies 21 respiratory pathogens. FINDINGS The main viruses identified by HTS were of families Herpesviridae, Coronaviridae, Parvoviridae and Picornaviridae, with the emphasis on rhinoviruses. The presence of respiratory viruses in the samples was confirmed by the PR21 multiplex RT-qPCR. Coronavirus, enterovirus, bocavirus and rhinovirus were found by multiplex RT-qPCR as well as by HTS analyses. MAIN CONCLUSIONS Wide virus diversity was found by different methodologies and high frequency of rhinovirus occurrence was confirmed in population in winter, showing its relevance for public health.

Abstract Noroviruses (NVs) are responsible for most cases of human nonbacterial gastroenteritis worldwide. Some parameters for the purification of NV virus-like particles (VLPs) such as ease of production and yield were studied for future development of vaccines and diagnostic tools. In this study, VLPs were produced by the expression of the VP1 and VP2 gene cassette of the Brazilian NV isolate, and two purification methods were compared: cesium chloride (CsCl) gradient centrifugation and ion-exchange chromatography (IEC). IEC produced more and purer VLPs of NV compared to CsCl gradient centrifugation.

Watermelon (Citrullus lanatus) cultivated in almost all tropical and subtropical regions of the world, has its largest output in China, and then, according to FAO data, Turkey, Iran and Brazil, being one of the main crops cultivated in State of Tocantins, Brazil. In this work was investigated the occurrence and distribution of the watermelon viruses, totaling 752 samples taken in a stratified experimental design in four representative regions of production: Gurupi (150), Lagoa da Confusao (232), Formoso do Araguaia (265) and Porto Nacional (105). The sampling and collecting the leaves of plants with the presence of symptoms were performed once a week during the entire cultivation cycle. As a result, were observed by Dot-ELISA method, different types of viruses, such as Papaya ringspot W (PRSV-W), Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV), Watermelon mosaic virus (WMV) (potyvirus), Cucumber mosaic virus ( CMV) (Cucumovirus) and Zucchini lethal chlorosis virus (ZLCV) (Tospovirus). Of these, PRSV-W was predominant (22%), followed by WMV (15%), ZLCV (11%), CMV (5%) and ZYMV (4%). Mixed infections with PRSV-W + WMV and PRSV-W + ZLCV were also observed around 20% frequency (expressed with symptoms differently from a single infection). The results provide important support for the program management viruses.

A ocorrência do Pepper mild mottle virus (PMMoV) em plantas de Capsicum tornou-se frequente no Brasil. Apesar da importância desse vírus, informações genômicas de isolados sul-americanos são ainda escassos. Neste trabalho, foi elucidada a sequência do genoma completo de um isolado brasileiro de PMMoV (BR-DF01) e esta foi comparada a outras sequências de PMMoV. A sequência de nucleotídeos do genoma completo do isolado BR-DF01 apresentou a maior identidade (99,54%) com o isolado japonês JP-J, que é capaz de contornar a resistência do gene L3 de plantas de Capsicum, como foi também observado para BR-DF01. A sequência de amino ácidos da capa protéica (CP) desses dois isolados foi idêntica, sugerindo que a CP é o fator-chave para a quebra de resistência baseada no gene L. Análises filogenéticas indicaram que BR-DF01 e isolados de PMMoV pertencentes ao agrupamento I, incluindo o isolado JP-J, podem compartilhar de um ancestral em comum.

Occurrence of Pepper mild mottle virus (PMMoV) on Capsicum plants has become common in Brazil. Despite the importance of this virus, genome information is still lacking for South American isolates. In this report, the first complete genome sequence of a Brazilian isolate of PMMoV (BR-DF01) was elucidated and compared with other PMMoV sequences. The nucleotide sequence of the complete genome of BR-DF01 isolate shared the highest nucleotide identity (99.54%) with the Japanese isolate JP-J, which does not overcome L3 resistance gene of Capsicum plants, as also observed for BR-DF01. The coat protein (CP) amino acid sequence of these two isolates was identical, which suggested that CP is the key factor for L-based resistance breaking. Phylogenetic analysis implied that BR-DF01 and PMMoV isolates belonging to Cluster I, including JP-J isolate, may share a common ancestral origin.

O Nordeste é a principal região produtora de melão do País, contribuindo com mais de 90% da produção nacional. Entretanto, o "amarelão do meloeiro", doença associada à presença de um novo vírus, o Melon yellowing-associated virus (MYaV), vem afetando a cultura desde 1999. Este trabalho teve como objetivo detectar a ocorrência do MYaV em meloeiros exibindo sintomas suspeitos da doença nos estados que são os maiores produtores da Região Nordeste. Em novembro de 2007, plantios comerciais de melão foram inspecionados para avaliar a ocorrência do "amarelão". Um total de 374 plantas foi coletado em áreas produtoras dos estados do RN (54) e CE (37) e também, do Submédio do Vale do São Francisco (283), situado nos Estados da BA e PE. A detecção do MYaV nas amostras foi realizada por DAS-Elisa utilizando-se anticorpos policlonais desenvolvidos pela Embrapa Hortaliças. Extratos preparados a partir de folhas e de hastes das plantas coletadas foram utilizados como antígeno. O MYaV foi detectado em 58,0% do total de plantas avaliadas, sendo que a concentração viral foi maior em hastes do que em folhas. A quantidade de plantas infectadas foi maior em amostras coletadas no RN (96,3%) e CE (75,7%) que no Submédio do Vale do São Francisco (PE e BA, com 48,4%). Estes resultados revelaram a ampla disseminação do MYaV nas principais áreas produtoras de melão da Região Nordeste e demonstraram a eficiência dos anticorpos na detecção viral.

The Northeast Region of Brazil is the main melon-producing region of the country, being responsible for more than 90% of the total national production. A new disease, known as "yellowing of melon plants", which has been associated to a new viral agent, the Melon yellowing-associated virus (MYaV), has been reported to cause damage on this crop since 1999. In this study we evaluated the occurrence of the MYaV in melon plants exhibiting suspicious symptoms of the disease in major melon growing states of the Northeast region. In November 2007, commercial melon fields were inspected for the occurrence of this virus. A total of 374 plants was collected in melon fields of the States of Rio Grande do Norte (54) and Ceará (37) and in the Submédio do Vale do São Francisco (283), in Bahia and Pernambuco States. Sample evaluation was performed by DAS-Elisa using polyclonal antibodies developed at the Embrapa Hortaliças for MYaV detection. Extracts prepared from leaves and stems of symptomatic plants were used as antigen. The MYaV was detected in 58.0% of the collected samples. Interestingly, the virus concentration was higher in stems than in leaves. The incidence of MYaV was higher in samples collected from Rio Grande do Norte (96.3%) and Ceará (75.7%) fields than from those in the Submédio do Vale do São Francisco (Pernambuco and Bahia, with 48.4%). These data confirmed the widespread occurrence of the virus in melon fields of the main melon-producing areas of Northeastern Brazil and the efficiency of the antibody for MYaV detection.

A doença conhecida como "Amarelão do Meloeiro" é hoje uma das principais doenças em meloeiro no Nordeste do Brasil. Até o momento, somente o Melon yellowing-associated virus (MYaV), transmitido por moscas-brancas, foi detectado em plantas doentes e constitui-se no provável agente causador da doença. Para permitir uma diagnose inequívoca da doença, este trabalho objetivou a produção e avaliação de anti-soro policlonal contra o isolado "Bessa" de MYaV. Partículas virais foram purificadas e injetadas em coelhos para a produção do anti-soro, que mostrou ser específico sem a ocorrência de reações com extrato de plantas sadias e outros vírus que infectam o melão. Para a avaliação do anti-soro, 14 amostras de meloeiro com sintomas de amarelão oriundas de campos de produção de Pernambuco e Rio Grande do Norte foram avaliadas em DAS-Elisa. Onze amostras reagiram positivamente e verificou-se que a concentração viral maior é vista na haste e não nas folhas, sendo o tecido a ser selecionado para a realização de testes de detecção. Esse estudo demonstrou que o anti-soro policlonal produzido contra o MYaV é específico e poderá ser utilizado na detecção desse vírus em plantios comerciais de melão.

Today, the disease known as "Melon yellowing" is one of the major melon diseases in melon growing areas in the Northeast of Brazil. Up to the moment, only the Melon yellowing-associated virus (MYaV), transmitted by whiteflies, was detected in diseased plants, and it is the probable causing agent of the disease. To enable the unequivocal diagnosis of the disease, this study aimed to produce and evaluate a polyclonal antibody against the "Bessa" isolate of MYaV. Viral particles were purified and injected into rabbits for antiserum production, which was specific without any reaction with healthy plant sap. For antiserum evaluation, 14 melon samples with yellowing symptom from fields of Pernambuco and Rio Grande do Norte were evaluated by DAS-Elisa. A total of eleven samples reacted positively and the test showed that the virus concentration is higher at the stems instead of leaves, and therefore stems should be selected to be used in detection tests. This study demonstrated that the polyclonal antiserum produced against MYaV was specific and can be used to detect it in commercial melon fields.

Devido às falhas encontradas no método de inoculação de begomovírus em plantas de tomateiro, um método eficiente e confiável de inoculação de begomovírus foi desenvolvido utilizando como vetor a mosca-branca (Bemisia tabaci). A aquisição viral foi realizada em uma armadilha ('Tube-cage') feita a partir de um tubo de polipropileno contendo moscas-brancas de um ou dois dias de idade e o ápice de uma planta de tomate infectada com um begomovírus. Após 48 horas de período de aquisição, procedeu-se à inoculação utilizando-se uma armadilha em forma de anel ('Ring-cage') contendo as moscas-brancas virulíferas. A armadilha foi colocada na parte abaxial das folhas de plântulas de tomateiro. Após o período de inoculação de 48 horas, as moscas-brancas foram eliminadas e as plantas inoculadas foram incubadas por 28 dias em casa-de-vegetação. Utilizando-se este método três moscas-brancas virulíferas por planta foram suficientes para causar infecção em tomateiro susceptível cv. Viradoro. Este procedimento foi aplicado para avaliar a resistência de tomateiro linhagem 486-1 (resistente) em comparação com 'Viradoro'. Hibridização por dot-blot confirmou a susceptibilidade de 'Viradoro' e a resistência da linhagem 486-1, mostrando a utilidade deste método na seleção de plantas resistentes. Este método também permitiu a avaliação da presença do vírus nas folhas inoculadas e em folhas superiores não inoculadas, indicando que o mecanismo de resistência da linhagem 486-1 poderá estar atuando nas folhas inferiores inoculadas, não havendo translocação viral para as folhas superiores.

Due to failures of infection after mechanical inoculation of begomovirus on tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) plants, an efficient and reliable begomovirus inoculation method was developed using the whitefly vector (Bemisia tabaci). Virus acquisition was carried out using a 'Tube-cage', made of a polypropylene tube, containing one to two day-old whiteflies and a tomato plant apex infected with a begomovirus isolate. After 48 h of acquisition access period, inoculation was done using a 'Ring-cage', containing viruliferous whiteflies, attached to the abaxial side of the leaf of young tomato plants. 48 hours after acquisition, the whiteflies were eliminated and the inoculated plants were incubated for 28 days under greenhouse conditions. Three viruliferous whiteflies per plant were enough to cause infection in susceptible tomato cv. Viradoro. This procedure was applied to test the resistance of tomato line 486-1 (resistant line) in comparison with 'Viradoro' (susceptible cultivar). Dot blot hybridization confirmed the susceptibility of 'Viradoro' and the resistance of the line 486-1, showing the efficiency of this method for screening plants for disease resistance. This method is also a useful tool in detecting the presence of virus in inoculated (lower leaves) and in non-inoculated (upper leaves) in a given plant. Using this procedure, it was observed that the resistance of the line 486-1 probably is expressed in the inoculated leaf without virus translocation to the upper leaves.

O aumento na ocorrência de begomoviroses (geminiviroses) em tomateiros, Lycopersicon esculentum Mill., em várias regiões brasileiras, vem causando grandes prejuízos para o agronegócio de tomate, devido à ocorrência do inseto vetor, Bemisia argentifolii (Bemisia tabaci biotipo B). A diagnose é realizada em geral por "polymerase chain reaction" (PCR) ou por hibridização com sondas radioativas. A PCR é um método de alta sensibilidade, porém apresenta a desvantagem da possibilidade de obtenção de resultados falso-positivos, devido a contaminações, ou falso-negativos causados por inibidores contaminantes da reação, ou pela extrema especificidade dos iniciadores. A hibridização de ácidos nucléicos com sondas radioativas tem o seu uso limitado devido à necessidade de infra-estrutura especial, treinamento de pessoal, riscos para a saúde do manipulador e demanda constante de radioquímicos. O presente trabalho tem por finalidade demonstrar a viabilidade do uso do método de hibridização com sondas não-radioativas para a detecção de um begomovírus de tomateiro do Brasil. A sensibilidade do teste foi alta, obtendo-se detecção de até 0,1fg do DNA homólogo e em extrato bruto foliar diluído até 100 vezes.

Major outbreaks of tomato begomoviruses (geminiviruses) in several tomato Lycopersicon esculentum Mill growing in many parts of Brazil have been imposing significant losses upon the tomato agribusiness, due to the introduction of the Bemisia argentifolii (Bemisia tabaci biotype B). Polymerase chain reaction (PCR) and hybridization are generally used for diagnosis. The PCR is a detection method with high sensitivity, however it has the disadvantage of producing false-positives, due to contamination, or false-negatives caused by inhibitors or because of the high primer specifity. The use of nucleic acid hybridization with radio-labelled probes is restricted due to the requirement of special infrastructure and handling experience, the risk for the user’s health and a regular radiochemical element supply. This study is aimed at demonstrating the usefulness of the hybridization method with non-radioactive probes for detection of a tomato begomoviruses in Brazil. The sensitivity of this method was high enabling the detection of 0.1fg of homologous DNA and in crude sap extract diluted up to 100-fold.

O Potato virus Y (PVY) tornou-se o maior problema nas áreas de produção de batata semente do Brasil. Somente as estirpes comum (PVYº) e necrótica (PVY N) eram detectadas infectando batata no Brasil. Esta situação mudou drasticamente a partir de 1997 quando um surto epidêmico de uma variante da estirpe necrótica de PVY causando arcos e anéis necróticos na superfície do tubérculo (PVY NTN) foi observado no país. Este estudo visou avaliar e validar uma metodologia de diferenciação de estirpes que causam necrose em tubérculos, proposta por Weilguny e Singh (1998). Vinte e oito isolados de PVY originários de tubérculos infectados de batata, provenientes de quatro estados brasileiros, foram analisados em sua reação em plantas de fumo, por Elisa, utilizando anti-soro policlonal e pelo método 3-primer RT-PCR. Quatro isolados induziram clareamento de nervuras e manchas peroladas em folhas de Nicotiana tabacum conforme esperado para a estirpe comum. Os 24 isolados restantes induziram necrose de nervuras neste hospedeiro portanto, classificados como da estirpe necrótica. Todos os 28 isolados de PVY reagiram positivamente contra o anti-soro policlonal de PVY por Elisa. Três métodos de extração de RNA foram testados, sendo que o método de hidrocloreto de guanidina mostrou-se o mais eficiente e de menor custo. Dos 28 isolados submetidos ao RT-PCR, um isolado de Santa Catarina e três do Rio Grande do Sul foram diferenciados como PVYº, confirmando os resultados do teste biológico. Um isolado de PVY N foi detectado no Estado de Santa Catarina e quatro no Rio Grande do Sul. O PVY NTN foi detectado em Minas Gerais (seis isolados), Santa Catarina (três isolados) e São Paulo (dez isolados). Estes resultados confirmam a presença dessa variante necrótica, PVY NTN, nas principais regiões produtoras de batata do Brasil.

The Potato virus Y (PVY) has become the major virus problem in seed potato growing areas of Brazil. Only necrotic and ordinary PVY strains were found infecting potatoes in Brazil. This situation drastically changed around 1997 when an epidemic of a PVY necrotic variant causing necrotic rings on the potato tuber surface was observed in the country. This study aimed to test the tuber necrotic strain differentiation method proposed by Weilguny & Singh (1998). Twenty eight PVY isolates originated from infected tubers and leaves from four Brazilian States were analyzed by host reaction after inoculation in tobacco, by ELISA using polyclonal antiserum and by the 3-primer RT-PCR method. The ordinary strain type isolates induced vein clearing and chlorotic pearl spots on Nicotiana tabacum leaves. All 24 remaining isolates inducing vein necrosis in leaves were classified as necrotic strains. All 28 PVY isolates positively reacted to PVY polyclonal antiserum by Elisa. Three RNA extraction methods were compared and the guanidine hydrochloride method was the most efficient and of the lowest cost. One isolate from Santa Catarina State and three from Rio Grande do Sul out of 28 PVY isolates submitted to RT-PCR method were differentiated as PVYº, confirming the biological test. One isolate of PVY N was detected from Santa Catarina and four from Rio Grande do Sul State. The PVY NTN was detected in Minas Gerais (six isolates), Santa Catarina (three isolates) and São Paulo (ten isolates). These results confirmed the presence of this new variant, PVY NTN in the main potato growing areas of Brazil.

A determinação da diversidade de vírus no campo é vital para dar suporte a programas sustentáveis de melhoramento de hortaliças visando a obtenção de resistência genética a esses patógenos. Este estudo objetivou caracterizar quatro isolados de potyvírus encontrados infetando naturalmente plantas de pimentão (Capsicum annuum) Sa66 e Sa115, e tomateiro (Lycopersicon esculentum) IAC3 e Sa21. As características biológicas revelaram diferenças entre os isolados na abilidade de infetar diferentes genótipos de pimentão e tomateiro e na severidade de sintomas causados por estes isolados em comparação com a infecção resultante de um isolado de Pepper yellow mosaic virus (PepYMV). Estudos sorológicos mostraram ausência de reação cruzada dos isolados estudados com anti-soro para Potato virus Y (PVY). Entretanto, todos os isolados reagiram, em intensidades diferentes, com anti-soro para PepYMV. Todos os isolados mostraram alta percentagem de identidade (97 a 99%) de sequência de amino ácidos da capa proteica com PepYMV (accesso AF348610) e baixa (69 a 80%) com outras espécies de potyvírus. A comparação da região 3' não traduzida também confirmou esta similaridade, com identidade de 97 a 98% com PepYMV e de 47 a 71% com outros potyvírus. Os resultados mostraram que os isolados de PepYMV foram facilmente diferenciados de PVY por sorologia, a resposta de hospedeiros a cada isolado pode ser variável e a sequência de nucletídeos da região terminal 3' foi altamente conservada entre os isolados

Determination of virus diversity in the field is vital to support a sustainable breeding program for virus resistance of horticultural crops. The present study aimed to characterize four field potyvirus isolates found naturally infecting sweet pepper (Capsicum annuum) (Sa66 and Sa115) and tomato (Lycopersicon esculentum) (IAC3 and Sa21) plants. Their biological characteristics revealed differences among the isolates in their ability to infect distinct Capsicum spp. and tomato genotypes, and in the severity of symptoms caused by these isolates compared to the infection caused by an isolate of Pepper yellow mosaic virus (PepYMV). Absence of cross-reaction was found among the studied isolates with antiserum against Potato virus Y (PVY). However, all isolates reacted, at different intensities, with antiserum against PepYMV. All isolates showed high identity percentage (97 to 99%) of the amino acid sequence of the coat protein with PepYMV (accession AF348610) and low (69 to 80%) with other potyvirus species. The comparison of the 3' untranslated region also confirmed this finding with 97 to 98% identity with PepYMV, and of 47 to 71% with other potyviruses. The results showed that PepYMV isolates were easily differentiated from PVY by serology and that the host response of each isolate could be variable. In addition, the nucleotide sequence of the coat protein and 3' untranslated region was highly conserved among the isolates.

Infecções virais em alho são normalmente causadas por um complexo viral. Neste estudo, um complexo viral de alho, coletado em campo, em três regiões geográficas, foi testado com anti-soros monoclonais específicos para Garlic virus A (GarV-A), Garlic virus B (GarV-B), Garlic virus C (GarV-C) e um anti-soro policlonal capaz de detectar os três vírus mencionados e Garlic virus D (GarV-D). Procedeu-se à amplificação por transcriptase reversa-reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) usando oligonucleotídeos sintetizados a partir de regiões específicas de genes de proteínas capsidiais de allexivirus japoneses e disponíveis no GeneBank (National Center of Biotechnology Information - NCBI). Por esse procedimento, vírus individuais foram isolados e seqüenciados. Os vírus detectados foram biologicamente isolados por meio de sucessivas inoculações em Chenopodium quinoa. A análise das seqüências de nucleotídeos, de aminoácidos e os resultados sorológicos revelaram a presença de três espécies distintas de allexivirus GarV-C, GarV-D e Garlic mite-borne filamentous virus (GarMbFV) no Brasil.

Garlic viruses often occur in mixed infections under field conditions. In this study, garlic samples collected in three geographical areas of Brazil were tested by Dot-ELISA for the detection of allexiviruses using monoclonal specific antibodies to detect Garlic virus A (GarV-A), Garlic virus B (GarV-B), Garlic virus C (GarV-C) and a polyclonal antiserum able to detect the three virus species mentioned plus Garlic virus D (GarV-D). The detected viruses were biologically isolated by successive passages through Chenopodium quinoa. Reverse Transcriptase Polimerase Chain Reaction (RT-PCR) was performed using primers designed from specific regions of the coat protein genes of Japanese allexiviruses available in the Genetic Bank of National Center of Biotechnology Information (NCBI). By these procedures, individual garlic virus genomes were isolated and sequenced. The nucleotide and amino acid sequence analysis and the one with serological data revealed the presence of three distinct allexiviruses GarV-C, GarV-D and a recently described allexivirus, named Garlic mite-borne filamentous virus (GarMbFV), in Brazil.

O "print-capture (PC) Polymerase chain reaction (PCR) " foi avaliado como um método inovativo de detecção de vírus de plantas. Plantas de tomate (Lycopersicon esculentum) infetadas com begomovírus e moscas-brancas virulíferas foram usadas para estudar a eficiência do método. Os passos de captura do DNA foram realizados usando filtros de náilon não carregados ou papel-filtro como suporte sólido. Fragmentos de DNA amplificados de tamanho esperado foram consistentemente obtidos por PCR de plantas infetadas cultivadas em casa de vegetação, após aplicação direta dos materiais fixados na mistura para PCR. Entretanto, para a detecção de vírus feita de uma mosca-branca e de amostras de tomateiros cultivados no campo foi necessário um tratamento a alta temperatura do material fixado antes da amplificação por PCR. Na comparação entre o filtro de náilon e papel-filtro como suporte sólido, o filtro de náilon apresentou maior eficiência de detecção. A aplicação do PC PCR reduz as chances de ocorrência de resultados falsos-positivos pela diminuição de passos de manipulação durante a preparação do DNA-alvo. Este método mantém todas as vantagens da diagnose por PCR, como a alta sensibilidade sem a necessidade de uso de reagentes radioativos.

Print-capture (PC) Polymerase chain reaction (PCR) was evaluated as a novel detection method of plant viruses. Tomato (Lycopersicon esculentum) plants infected with begomovirus (fam. Geminiviridae, gen. Begomovirus) and viruliferous whiteflies were used to study the efficiency of the method. Print-capturing steps were carried out using non-charged nylon membrane or filter paper as the solid support for DNA printings. Amplified DNA fragments of expected size were consistently obtained by PCR from infected plants grown in a greenhouse, after direct application of printed materials to the PCR mix. However, virus detection from a single whitefly and from field-grown tomato samples required a high temperature treatment of printed material prior to PCR amplification. Comparison of nylon membrane and filter paper as the solid support revealed the higher efficiency of the nylon membrane. The application of print-capture PCR reduces the chances of false-positive amplification by reducing manipulation steps during preparation of the target DNA. This method maintains all the advantages of PCR diagnosis, such as the high sensitivity and no requirement of radioactive reagents.